Penjujukan masa sebenar molekul tunggal (SMRT)

Penjujukan SMRT didasarkan pada penjujukan mengikut sintesis. The DNA disintesis dalam sifar mod gelombang-panduan (ZMWs) - kecil yang seperti bekas dengan alat menangkap yang terletak di bahagian bawah telaga. Urutan dilakukan dengan menggunakan polimerase yang tidak dimodifikasi (melekat pada bahagian bawah ZMW) dan nukleotida berlabel fluoresen mengalir dengan bebas dalam larutan. Telaga dibina dengan cara yang hanya pendarfluor yang berlaku di bahagian bawah telaga dikesan. Label pendarfluor terlepas dari nukleotida setelah dimasukkan ke dalam helai DNA, meninggalkan yang tidak diubah DNA helai. Menurut Pacific Biosciences (PacBio), pemaju teknologi SMRT, metodologi ini membolehkan pengesanan modifikasi nukleotida (seperti metilasi sitosin). Ini berlaku melalui pernyataan kinetik polimerase. Ini membolehkan analisis 20, 000 nukleotida atau lebih, dengan panjang bacaan purata 5 kilobase. Pada tahun 2015, Pacific Biosciences mengumumkan pelancaran instrumen penjujukan baru yang disebut Sistem Sequel, dengan 1 juta ZMW berbanding 150, 000 ZMW dalam instrumen PacBio RS II. Jujukan SMRT disebut sebagai penjujukan "generasi ketiga" atau "lama dibaca".

Gambar 151A | Analisis penggabungan berbilang, terpecah-pecah mesti disatukan berdasarkan kawasan yang bertindih. | Suspencewl / CC0 | Page URL : (https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Mapping_Reads.png) dari Wikimedia Commons

Pengarang : Milos Pawlowski

Rujukan:

Teknik Biologi Molekul I

Alat Biologi Molekul II